Выявление РНК вируса гриппа А и B (Myxovirus influenza)

Метод определения: Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.
Исследуемый биоматериал: Соскоб, Соскоб из носоглотки, Соскоб из носоглотки и/или ротоглотки

Определение генетического материала вируса гриппа серотипов А и В в образце биоматериала методом полимеразной цепной реакции в реальном времени. Исследование проводят для дифференциальной диагностики гриппа, гриппоподобных состояний и острых респираторных заболеваний, которые сопровождаются повышением температуры тела. Определяемые показатели:
1. Influenza A virus, РНК
2. Influenza B virus, РНК

Грипп – острая респираторная вирусная инфекция с воздушно-капельным путём передачи. Возбудитель – оболочечный вирус семейства Orthomyxoviridae с сегментированным негативным РНК-геномом и нуклеокапсидом в форме спирали; в семействе три рода: Influenza A virus, а также Influenza B virus и Influenza C virus. По структурным различиям нуклеопротеида выделяют три серотипа: A, B и С. Серотип A встречается и у человека, и у животных, тогда как варианты B и C свойственны преимущественно человеку; на серотип А приходится подавляющее большинство сезонных эпидемических и пандемических вспышек, серотип B вызывает у людей сезонные вспышки. Вирусы гриппа А широко распространены в природе и выделяются у большинства зверей и птиц, отчего обладают высоким пандемическим потенциалом и преодолевают межвидовый барьер; наиболее высокопатогенным считается вирус свиного гриппа H1N1, способный привести к летальному исходу. Основная причина эпидемий и пандемий – высокая вариабельность вируса из-за изменений генома, затрагивающих фрагменты, которые кодируют поверхностные антигены типов А и В и определяют их специфичность.

Инкубационный период непродолжительный: по данным лабораторий он составляет от 1 до 4 суток, в среднем около 48 часов, с колебаниями от 10 часов до 9 суток. Источником инфекции служит человек. В отличие от прочих ОРВИ начало практически всегда внезапное и острое. Типичная картина у взрослых: внезапный озноб, лихорадка, прострация, кашель и генерализованные боли с преимущественной локализацией в спине и ногах, сильная головная боль, нередко со светобоязнью. Респираторные симптомы поначалу лёгкие – першение в горле, жжение за грудиной, непродуктивный кашель, иногда насморк; позже преобладает поражение нижних дыхательных путей, а кашель становится стойким, хриплым и продуктивным. Возможны желудочно-кишечные симптомы, чаще связанные с пандемическим штаммом H1N1 2009 года: у детей выраженная тошнота, рвота либо боль в животе, у младенцев – синдром, подобный сепсису. Острые проявления быстро стихают через 2-3 дня, лихорадка держится до 5 суток, а кашель, слабость, потливость и утомляемость сохраняются днями, иногда неделями. Большинство заболевших переносит инфекцию без осложнений, однако возможны тяжёлое течение и жизнеугрожающие состояния, прежде всего у детей раннего возраста, пожилых, беременных и родильниц, лиц с хронической лёгочной и сердечной патологией, метаболическими нарушениями, дефектами иммунитета, неврологическими и когнитивными расстройствами. К опасным осложнениям относятся также менингит и менингоэнцефалит.

Идентифицировать вирус требуется в кратчайшие сроки: заболевание высокозаразно, а эффективность противовирусных препаратов максимальна при назначении в первые 48 часов после инфицирования. Своевременная диагностика и раннее начало терапии улучшают прогноз и снижают вероятность осложнений. Рекомендуемым методом лабораторной диагностики служит выявление РНК вируса методом ПЦР: наибольших специфичности и чувствительности достигают тесты на основе полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией и гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов амплификации в реальном времени. Такой подход вытеснил применявшиеся ранее выделение вируса в культуре клеток, серологические исследования и иммуноферментный анализ. Антигенные тесты стандартизированы недостаточно, их чувствительность и специфичность несколько ниже: у прямой иммунофлюоресценции и ELISA этот показатель составляет около 65-75 % из-за структурного разнообразия антигенов H и N. Результаты определения антител оцениваются, как правило, ретроспективно, поскольку антитела появляются поздно. В основе теста лежит выявление консервативной последовательности, общей для разных штаммов серотипов А и В, что даёт чувствительность 98-100 %. Определяемый фрагмент – специфический участок нуклеиновой кислоты Influenza virus A и Influenza virus B; неспецифических реакций в отношении прочих вирусных и бактериальных возбудителей ОРЗ не отмечается. Чувствительность метода почти не меняется, если материал взят на фоне начатой противовирусной терапии, поскольку реакция выявляет не сам вирусный агент, а фрагмент его нуклеиновой кислоты. Ложноположительные и ложноотрицательные ответы редки и в эпидемию, и в период низкой заболеваемости. Отделяемое носо- и ротоглотки берут не позднее 72-96 часов от начала болезни, а оптимально в первые 48-72: интенсивная репликация вируса в верхних дыхательных путях идёт первые четверо суток болезни. При вовлечении нижних отделов вирусная нагрузка держится высокой дольше, но в мазке из ротоглотки возбудитель может не выявляться, и тогда рекомендовано повторное исследование отделяемого нижних дыхательных путей.