Анализ hbv-днк (количественно)

Анализ на гепатит В:

• 22 ПЦР (прямое выявление возбудителя)
• 23 ИФА (определение антигенов и антител)

Гепатит B (ВГВ, HВV) – острое системное вирусное заболевание. Характеризуется поражением печени и различными внепеченочными проявлениями, Протекает остро или хронически, в желтушной (35%) или безжелтушной (65%) формах. Вирус гепатита В  содержит ДНК и чрезвычайно устойчив во внешней среде (к УФ-лучам, температуре, детергентам). Гепатит В передается с кровью и биологическими жидкостями парентеральным, трансплацентарным, половым и бытовым путями. Группу повышенного риска составляют лица, практикующие внутривенную наркоманию, беспорядочные половые связи, а также медицинские работники, пациенты, нуждающиеся в гемодиализе или переливаниях крови, заключенные, члены семей HBs-положительных лиц, новорожденные от HBs-положительных матерей.

Проникая в организм, вирус гепатита попадает в макрофаги крови и разносится по организму. Репликация вируса происходит в лимфатических узлах, костном мозге, фолликулах селезенки, макрофагах, гепатоцитах. Повреждение печени обусловлено, в основном, за счет иммунного лизиса; также вирус оказывает прямое цитопатическое действие.

Инкубационный период – в среднем составляет 4-12 дней, но может растягиваться до 12 месяцев. В конце инкубационного периода повышаются уровни печеночных трансаминаз, увеличиваются печень и селезенка. Возможно повышение концентрации билирубина до 2-2,5 нормальных значений, хотя это не приводит к потемнению мочи. Встречаются гриппоподобный, артралгический, диспептический или смешанный варианты клинического течения продромы. Наиболее неблагоприятным является течение продромы по типу сывороточной болезни (зуд, мигрирующие околосуставные высыпания).

Острый период (2-12 дней) протекает с интоксикационным синдромом: снижением аппетита, диспепсией, инверсией сна. В трети случаев возникает желтуха: резко повышается уровень билирубина, слизистые оболочки и кожа окрашиваются в различные оттенки желтого цвета, появляется зуд. Наиболее тревожным симптомом является снижение протромбинового индекса и альбумина крови, свидетельствующие о печеночно-клеточной недостаточности. Осложнение заболевания печеночной энцефалопатией свидетельствует об острой гепатодистрофии. Бурный гуморальный иммунный ответ зачастую приводит к появлению иммунных комплексов, оседающих на эндотелии сосудов почек, щитовидной железы, половых органов и др. Возникают васкулиты. В программе системных проявлений HBV-инфекции могут возникать аутоиммунный тиреоидит, хронический гастрит, синдром Шегрена, идеопатическая тромбоцитопеническая пурпура, узелковый периартериит, гломерулонефрит, синдром Гийена – Барре, ревматоидный артрит, и др.

Фаза выздоровления характеризуется исчезновением признаков холестаза, нормализацией процессов обмена веществ, восстановлением функции печени, на первый план выходят системные проявления заболевания. По сравнению с другими вирусными гепатитами, гепатит В имеет более системный характер, менее благоприятно протекает у детей. Хроническое течение возникает в 5% случаев. «Здоровые носители» HBsAg, также как и больные хроническим гепатитом В, подвержены высокому риску развития цирроза печени и гепатоцеллюлярной карциномы. Системные проявления не всегда исчезают вместе с излечением гепатита В.

Разработанные на сегодняшний день вакцины не вызывают вакцино-обусловленного гепатита В, т.к. представляют собой генно-инженерный HBs-антиген. Однако вакцинопрофилактика обеспечивает защиту от гепатита В только на 5-7 лет. До вакцинации, по итогам вакцинации и по прошествии 5 лет после вакцинации необходимо исследовать уровень anti-HBs-антител.

В современной лабораторной диагностике вирусного гепатита В основная роль отводится выявлению в анализах серологических маркеров инфицирования вирусом: HBsAg, HВeAg, анти-НВс класса IgM и IgG, анти-НВе и анти-HBs и геномной ДНК вируса.

Выявление ДНК HBV

Качественное обнаружение в крови HBV ДНК является основным арбитражным критерием, характеризующим активность вирусного процесса, который можно использовать при заражении мутантными формами вируса, при иммуносупрессии (больные онкологическими заболеваниями, наркоманы и т.д.) и для количественной оценки присутствующего в организме возбудителя.

Количественная характеристика содержания ДНК HВV в клинических образцах важна для оценки эффективности противовирусной терапии. Если концентрация вируса меньше 105 копий/мл, то прогноз курса лечения благоприятный, если выше, то необходимо применить другие схемы лечения.

Снижение концентрации ДНК вируса гепатита В в течение недели после начала курса лечения не менее чем на треть является быстрым и точным параметром для предсказания эффективности терапии, приводящей к раннему вирусологическому ответу.

В целом, показанием к анализу на наличие HBV ДНК служит выявление ранней HBV-инфекции, поскольку ПЦР дает положительный результат уже на первых неделях инфекции при отсутствии других серологических маркеров.

Серологическая диагностика

Анализ крови на выявление HBs Ag (поверхностный антиген вируса гепатита В, «австралийский антиген»)

HBsAg - поверхностный антиген вируса гепатита В, основной маркер при анализе острого и хронического гепатита В - представляет собой белковую молекулу (липопротеин), ответственную за адсорбцию вируса на поверхности гепатоцитов (клеток печени). После встраивания вируса в геном печеночных клеток они начинают продуцировать вирусную ДНК и белки, и новые молекулы HBsAg поступают в кровь.

HBsAg - основной маркер инфицирования HBV. При остром вирусном В в большинстве случаев (90-80 %) HBsAg удается выявить в инкубационном периоде, начиная с 3-5-й недели заражения. Средняя продолжительность циркуляции антигена - 70-80 дней. Быстрое исчезновение HBsAg (в первые дни желтухи) с появлением антиНВs - плохой прогностический признак. При хроническом гепатите В HBsAg может циркулировать в крови больного на протяжении многих лет. Возможно пожизненное носительство HBsAg.

HBsAg способен активизировать клеточные протоонкогены. Через достаточно длительный срок (более 20 лет) возможно развитие гепатокарциномы.

Выявление HBeAg (сердцевинный антиген вируса гепатита В)

HBеAg (антиген инфекционности) представляет собой сердцевинный белок, кодируется тем же геном, что и НBсore Ag. Обнаруживается в крови в период вирусемии, параллельно с HBsAg, начиная с конца инкубационного периода. В этом периоде с высокой вероятностью методом ПЦР обнаруживается HBV-DNA(ДНК ВГВ). Вероятность заражения здорового человека при попадании HBеAg "+" крови в десятки раз выше, чем в том случае, если сероконверсия наступила, HBeAg исчез и заменился anti-HBe. В крови циркулирует недолго, меньше, чем HBsAg, исчезает к концу желтушного периода (примерно к 9 неделе с начала болезни). Циркуляция антигена инфекционности в течение 2 мес и более является признаком хронизации гепатита В. Т.о. этот показатель может служить маркером контагиозности хронических НВsAg - носителей. При хроническом ВГВ с высокой репликативной активностью возможно обнаружение его в течение нескольких лет. Этот антиген циркулирует только в присутствии HBsAg, поэтому целесообразно обследовать именно HBsAg-позитивные сыворотки.

Выявление Anti-HBс (суммарные антитела к HBcore-антигену вируса гепатита В)

Антитела к HB-core антигену появляются в анализе при остром гепатите В в крови вскоре после появления HBsAg, персистируют после исчезновения HBs-антигена перед появлением анти-HBs-антител и сохраняются длительное время после выздоровления (при HBV-инфекции они самые "долгоживущие" и могут обнаруживаться пожизненно). В отсутствие информации о других маркерах в анализе гепатита В, наличие анти-HBcore позволяет предположить, что человек может быть активно инфицирован или переносил гепатит В в прошлом и имеет иммунитет. Анти-HBcore-антитела могут быть единственным серологическим маркером перенесенного гепатита В и потенциально инфицированной крови.

Определение суммарных антител anti-НBcore применяют в целях диагностики текущего или перенесенного в прошлом гепатита В. Присутствие общих антител anti-НBcore не дает возможности дифференцировать острую, хроническую или перенесенную в прошлом инфекцию.

Выявление Anti-HBс IgM (антитела класса М к HBcore-антигену вируса гепатита В)

Антитела к HBсore антигену класса М начинают вырабатываться в период первого появления клинических симптомов гепатита В и сохраняются до периода выздоровления.

Выявление Anti-HBe (антитела к HBe-антигену вируса гепатита В в анализе)

Синтез антител к HBeAg в организме начинается после элиминации антигена инфекционности, они свидетельствуют о прекращении репликации (размножения) вируса в организме. К концу 9-й недели эти антитела можно обнаружить у 90% больных. В период выздоровления эти антитела могут исчезать. Однако обнаружение anti-HBe не всегда является показателем отсутствия инфекционности данной конкретной сыворотки. Иногда возможно появление мутантной, дефектной HBeAg-отрицательной формы вируса, т.е. вирус данный антиген синтезировать не способен. Но при этом хотя в крови обнаруживаются anti-HBe, высокая репликативная активность вируса сохраняется.

Выявление Anti-HBs (анализ на антитела к HBs-антигену вируса гепатита В)

Anti-HBs-антитела появляются в фазе выздоровления после острого гепатита В, обычно через 3-4 месяца после элиминации HBsAg (так называемая фаза "окна"). Продолжительность фазы окна может варьировать от 1 мес до 1 года, в зависимости от состояния иммунной системы больного.В этот период "окна" важно обследовать пациента на anti-HBc IgM.

Anti-HBs-антитела особенно важны в обеспечении иммунной защиты против данного вируса, поэтому количественное определение анти-HBs-антител обычно используют в контроле эффективности иммунитета при вакцинации против гепатита В. Со временем, титр антител снижается вплоть до необнаружения.Иногда возможно пожизненная циркуляция anti-HBs антител. Появление в анализах анти-HBs на фоне клинического улучшения у больного гепатитом В и исчезновение HBsAg является хорошим прогностическим признаком,и показателем выздоровления.

При хроническом течении гепатита В возможно параллельное определение поверхностного антигена и антител к нему. Обнаружение в анализе анти-HBs в острой фазе гепатита В параллельно с HBsAg свидетельствует о неблагоприятном прогнозе заболевания.

Различные сочетания серологических маркеров инфицирования вирусом гепатита В и их интерпретация

Анализы при гепатите B в лаборатории «ЛИТЕХ»:

Прямое выявление наличия вируса в организме:

• Метод исследования: Полимераная цепная реакция (ПЦР) (выявление специфического фрагмента ДНК вируса)
• Качественное определение HBV ДНК.
• Количественное определение HBV ДНК. Анализ на гепатит проводится после положительного качественного исследования.
• Материал для исследования: сыворотка крови. Только в одноразовой пластиковой пробирке с плотно завинчивающейся крышкой.

Серологические исследования:

• Определение антигенов и специфических антител к антигенам вируса гепатита В: HBsAg, HBeAg, Anti-HBc, Anti HBc IgM, Anti-HBe, Anti-HBs.
• Метод исследования: иммуноферментный анализ на гепатит (ИФА)
• Материал для исследования: сыворотка крови. Только в одноразовой пластиковой пробирке с плотно завинчивающейся крышкой